TECNICAS HISTOLOGICAS1 2015_12_10 21_11_15 UTC

TECNIAS HISTOLOGICAS EDUARDO A. VILLACIS G. [email protected] com WP: Medicinauce TÉCNICAS HISTOLOGICAS Se define Técnica Histológica como el conjunto de operaciones a que se somete una materia organizada, a fin de posibilitar su estud10 al microscopio. Las Técnicas Histológicas incluyen los siguientes pasos: Obtención de la Muestra. CIFijación de la Muestra. ODeshidratación. Dlnclusión en Parafina. CIObtenclón de cortes. Koloración.

C] Montaje OBTENCION DE LA MUESTRA El material a utilizar puede ser extraído de los diversos animales de laboratorio, o bien puede tratarse de material humano. Fases en la obtención de material nimal: Muerte del animal. las muertes violentas incluyendo aquellas en que este la duda de violencia. 2. – Personas que fallecieron en áreas de reclusión y/o seguridad y que estuvieron bajo responsabilidad de servidores públicos de seguridad pública y procuración de justicia. 3. – Muertes en la vía pública. 5. Muertes sospechosas de haberse producido por violación a los derechos humanos. Requisitos para la práctica de la necropsia: Orden escrita para la práctica del estudio de necropsia firmada por la Autoridad Ministerial. Copia de la Averiguación Previa. Acta médica. En caso de haber recibido atención médica oras o días prewos a su muerte, resumen clínico de las intervenciones y tratamientos

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a las que fue sometido. Orden de entrega a los familiares y de aviso a la Autoridad del Registro C Objetivos a determinar: muestren el mayor parecido posible a su estado in vivo.

Aumentar la dureza del tejido para facilitar la preparación de finas películas de éste. Destruir bacterias y gérmenes que pudieran encontrarse en ellos. Interrumpir los procesos celulares dinámicos que ocurren a la muerte de la célula. La fijación mantiene las estructuras al estimular la formación de enlaces cruzados entre las proteínas. Regla de Oro para la Fijación La mejor fijación es cuando a pasado el menor tiempo entre la muerte del tejido y la fijación. Tamaño de la Muestra. El tamaño de la muestra debe de ser de 2-3 cm. ariando el estudio para lo cual de va a utilizar. FIJACION (CONTINUACION 31_1f8 La mayor parte de los fijad como oxidantes, completar la acción de cada uno de ellos o atenuar sus defectos. a) Líquido de Fleming, mezcla cromo-osmio-acética. b) Liquldo de Zenker, mezcla bicromato-sublimado-acética. c) Líquido de Helly, mezcla Zenker-formol. d) Liquido de Bouin, mezcla picro-formos-acética. e) Liquido de Duboscq-3rasil, o Bouin alcohólico. FIJADORES Físicos: 1. Desecación. 2. Calor seco. 3. Calor húmedo. 4. Frío. 5. Congelación y desecación. ara Microscopia Electrónica se usan: Glutaraldeh(do al 2. 5%, Paraformaldehído, Tetróxido de Osmio y Permanganato de Potasio Permiten conservar detalles estructurales finos, ya que otros fijadores como el formaldehido, son muy enérgicos en su acción con las proteínas. Actúan como colorantes electrodensos, permitiendo observar al tejido con el haz de electrones. Una solución de Glutaraldehído al 2. 5% en un tampón a pH 7. 4, evita la violenta desnaturalización de las proteínas guardando detalles finos de la célula. Es el más usado en Microscopia Electrónica.

DESHIDRATACION Y ACLARAMIENTO DESHIDRATACIÓN Después que la muestra ha sido fijada se elimina el fijador y se desh Debido a que una eran pa está ACLARAMIENTO O DIAFANIZACIÓN Luego de deshidratar el tejido, se pasa a una solución de una sustancia que es miscible tanto con el alcohol como con el medio de inclusión a utilizar (en la mayoría de los casos se utiliza como medio de inclusión Parafina liquida). La sustancia comúnmente utilizada es el Xileno o Xilol. Se llama aclaramiento ya que el tejido se torna transparente o claro en el xileno, esto se debe a que cambia su índice de refracción.

También se pueden utilizar Tolueno, Benzol o Cloroformo como medios de aclaramiento. NOTA: El alcohol y el xileno disuelven los lípidos de la célula y por lo cual al extraerse también se extraen las grasas y los lípidos de la célula. DESHIDRATACION E INCLUSION EN PARAFINA A fin de que se puedan obtener cortes suficientemente finos para ser observados al microscopo, los tejidos tienen que ser incluidos y envueltos por una sustancia de consistencia firme. Las sustancias usadas para este fin son: gelatina y parafina.

El objeto de la inclusión es: Tener un objeto lo suficientemente duro para su manejo y corte. La inclusión se logra al infiltrar la parafina liquida o cualquier medio de inclusión en estado líquido al tejido, que disuelve el medio de aclaramiento y penetra en el tejido. Por lo general se coloca la ejido en un poco de parafina fundida en un molde de papel o metal de forma rectangular y se deja solidificar a temperatura ambiente, formándose un bloque sólido de parafina con el trozo de tejido incluido, a este bloque se le denomina Taco.

El taco ahora se puede cortar en secciones lo suficientemente delgadas como para permitir el paso de la luz. La mayor parte de los preparados para microscopia óptica tienen un grosor entre 3 10 micrómetros. Para estos cortes se utiliza un aparato llamado MICROTOMO. Cuando deseamos estudiar grasas o lípidos que se extraen en el proceso de aclaramiento o enzimas que quedan inactivadas por el calentamiento de la inclusión, nos auxiliamos con la Técnica de Congelación de Tejidos. Un tejido congelado, es los suficientemente duro para ser cortado.

Se sumerge la muestra de tejido en Nitrógeno l[quido para tener una congelación rápida. OBTENCION DE CORTES Luego se corta con un aparato especial denominado MICROTOMO DE CONGELACIÓN, existe un aparato más elaborado y eficiente para los cortes de ongelación llamado CRIO La ventaja de esta técnica rtes que se TINCION DE LA MUESTRA Las tinciones son combinaciones de colorantes ácidos y básicos que permiten obtener suficiente contraste de color en los cortes histológicos comunes.

A continuación presentaremos una lista de las tinciones mas comunes: Hematoxilina y Eosina: La hematoxilina al ser básica tiñe ácidos de color morado (núcleos con DNA y RNA), mientras que la eosina es un ácido y tiñe bases de color rosado (citoplasma). PAS (Ácido Peryódico de Schiff): Tiñe carbohidratos (mucopolisacáridos) de color rojo, por ejemplo las células aliciformes en el intestino. Tricrómico de Masson: Tiñe de color azul la colágena, de rojo la queratina, y de morado los núcleos (muy utilizada para los cortes de piel).

Nissl: Tiñe de color morado el retículo endoplásmico rugoso y los corpúsculos de Nissl en las neuronas. Pentacrómico de Movat: Tiñe de amarillo la colágena, los músculos de color rojo, de azul mucopollsacáridos, la elastina de color negro, y los núcleos de morado. Wright: utilizado en frotis sanguíneos, permite observar todas las células sanguíneas, coloreando los eritrocitos de color rosado, con un centro claro. Permite observar todas las células sangu(neas, coloreando los eritrocitos de C] Reyes Mota: Tiñe la elastina de color morado.

Además de las tinciones comunes tenemos a la inmunohistoquímica, la cual se basa en la utilización de específicos, los cuales mar material material basófilo basófilo tonos de en tonos de morado. Citoplasma Citoplasma en en tonos tonos de rosado Glándula Glándula salival salival Sublingual, Sublingual, objetivo 40x objetivo 40X Impregnación Impregnación Argéntica Argéntica Resultados: Célula (neurona): (neurona): -Soma -Soma yy prolongaciones prolongaciones (dendritas, (dendritas, axón) 81_1f8

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