Cariotipo

Cariotipo gy pedrotcr00714 cbenpanR 10, 2016 3 pagos Cariotipo -Cultivo de linfocitos Toma de muestra 1 . La toma de muestra debe ser en un tubo(tapa verde) con heparina como anticoagulante. 2. Procesar inmediatamente las muestras, de preferencia en las primeras 48 hrs. Antes de empezar: *Realizar la limpieza de la campana. *Descongelar las alícuotas del medio de cultivo. No agregar la sangre al medio de cultivo frío. *Preparar la solución de Carnoy (metanol: acido acético: 3:1 y guardar a -200C), colocar la solución hipotónica a 370C. Limpiar con etanol al 70% los ortaob’etos a utilizar, dejar secar asegurarse que no Identificar los portao tes _ 1 . Agregar 14 gotas d org I portaobjetos. bre del paciente. o con 8 ml de medio de cultivo pBMax y mezclar suavemente. 2. Incubar a 370C por 72 horas. 3. Agregar 7 gotas de colchicina( 1 ng/ml), mezclar e incubar a 370C por 45 minutos. 4. Centrifugar a 12 000 rpm por 10 minutos, se retira el sobrenadante dejando 0. 5 ml por encima SWipe page encima del botón celular. 5. Agregar solución hipotónica precalentada (KCI 0. 075M) hasta completar 10 ml, resuspender suavemente e incubara 370C por 20 minutos. 6.

Centrifugar

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a 12 000 rpm por 10 minutos, se retira el obrenadante dejando 0. 5 ml por encima del botón celular. 7. Agitar vigorosamente el botón celular y agregar solución de Carnoy hasta completar 10 ml. 8. Centrifugar a 12 000 rpm por 10 minutos, se retira el 9. Repetir el paso 7 y 8 dos veces o hasta obtener un botón celular limpio. 10. Llevar a 40C por 24 horas. 11. Centrifugar a 12 000 rpm por 10 minutos, se retira el 12. El goteo se realiza resuspendiendo el botón celular en 1 ml de sobrenadante, una vez resuspendido el botón se dejan caer 1 0 2 gotas sobre el portaobjetos se dejan secar y se madura por 20 días. 3. Continuar con la técnica de bandas. Técnica de bandas- Bandas G Preparar el buffer gurrs 6. 8. (Disolver una tableta de buffer gurrs en 1 L de agua destilada). Preparar 5 gurrs 6. 8. (Disolver una tableta de buffer gurrs en 1 L de agua destilada). Preparar 500 ml de NaCl 4. 5 g de NaCl en 500 ml de agua Preparar la solución de tripsina (10 ml de solución madre de tripsina y 45 ml de NaCl 0. 9%). Preparar la solución de Giemsa (3 ml de solución Giemsa, 1 ml de acetona y 48 ml de buffer gurrs 6. 8). Lavar y secar 6 copas coplin. Protocolo: 1 .

Colocar las soluciones preparadas en las copas coplin, como igue: 1- Solución de tripsina 2- solución de Naci 0. 9% 3- Solución de NaCl 0. 9% 4- Solución de Giemsa 5- Buffer Gurrs 6. 8 6- Buffer Gurrs 6. 8 2. Colocar la laminilla en la solución de tripsina por aproximadamente 50 segundos (este tiempo varia de cultivos a cultivo y de la actividad de la tripsina), enjuagar en las copas 2 y 3 y dejar en la copa 4 por aproximadamente 5 minutos, posteriormente enjuagar en las copas 5 y 6. 3. Esperar a que sequen las laminillas y observar al microscopio para determinar si el tiempo de tripsina fue suficiente. 31_1f3