Cariotipo
Cariotipo gy pedrotcr00714 cbenpanR 10, 2016 3 pagos Cariotipo -Cultivo de linfocitos Toma de muestra 1 . La toma de muestra debe ser en un tubo(tapa verde) con heparina como anticoagulante. 2. Procesar inmediatamente las muestras, de preferencia en las primeras 48 hrs. Antes de empezar: *Realizar la limpieza de la campana. *Descongelar las alícuotas del medio de cultivo. No agregar la sangre al medio de cultivo frío. *Preparar la solución de Carnoy (metanol: acido acético: 3:1 y guardar a -200C), colocar la solución hipotónica a 370C. Limpiar con etanol al 70% los ortaob’etos a utilizar, dejar secar asegurarse que no Identificar los portao tes _ 1 . Agregar 14 gotas d org I portaobjetos. bre del paciente. o con 8 ml de medio de cultivo pBMax y mezclar suavemente. 2. Incubar a 370C por 72 horas. 3. Agregar 7 gotas de colchicina( 1 ng/ml), mezclar e incubar a 370C por 45 minutos. 4. Centrifugar a 12 000 rpm por 10 minutos, se retira el sobrenadante dejando 0. 5 ml por encima SWipe page encima del botón celular. 5. Agregar solución hipotónica precalentada (KCI 0. 075M) hasta completar 10 ml, resuspender suavemente e incubara 370C por 20 minutos. 6.
Centrifugar
Colocar las soluciones preparadas en las copas coplin, como igue: 1- Solución de tripsina 2- solución de Naci 0. 9% 3- Solución de NaCl 0. 9% 4- Solución de Giemsa 5- Buffer Gurrs 6. 8 6- Buffer Gurrs 6. 8 2. Colocar la laminilla en la solución de tripsina por aproximadamente 50 segundos (este tiempo varia de cultivos a cultivo y de la actividad de la tripsina), enjuagar en las copas 2 y 3 y dejar en la copa 4 por aproximadamente 5 minutos, posteriormente enjuagar en las copas 5 y 6. 3. Esperar a que sequen las laminillas y observar al microscopio para determinar si el tiempo de tripsina fue suficiente. 31_1f3